方法 灌胃法。
结果 断肠草提取物对小鼠具有很强的毒杀作用。一次性注射0.5 m l、浓度为0.003、0.004、0.005 g /m l的断肠草提取物时, 小鼠在30 m in内的死亡率分别为8.33%、41.67%、100%。同时, 断肠草提取物对小鼠的毒杀作用迅速。当浓度为0.005 g /m l时, 小鼠在20 m in内全部死亡, 平均致死时间为12.8 m in; 浓度为0.004 g /m l时, 试鼠在28 m in内死亡了5只,剩余的2 d内未见死亡; 浓度为0.003 g /m ,l 试鼠在16 m in时死亡1只, 剩余的2 d内仍未见死亡。中毒小鼠均表现出活动迟缓, 步伐不稳, 身体抽搐, 肤色变黑等一些症状。
结论 断肠草提取物对小鼠毒杀作用显著, 所需剂量少, 致死时间短, 为开发植物性灭鼠剂提供了技术参考。
鼠类不仅种类多、个体数量多, 而且生长发育快, 具有强大的繁殖力、分布广、危害严重等。目前防治鼠害的方法主要有化学灭鼠、生物灭鼠、人工机械灭鼠等。长期以来使用最多、最广的为化学灭鼠。但化学灭鼠会使害鼠易产生耐药性和拒食性, 导致防效下降, 且造成环境污染, 产生二次中毒[ 1] 。断肠草(Gelesem ium elegans Benth) 属马钱科( Logan i-aceae)胡蔓藤属(G elesem ium ), 俗名大茶药、胡蔓藤等, 为多年生常绿藤本植物。断肠草在医药、畜牧业和农业方面都有开发和利用[ 2- 3], 尤其在医药方面开发利用的很多, 研究表明断肠草有抗肿瘤、免疫调节、镇痛、治疗皮肤病、扩瞳等作用。断肠草含多种钩吻碱, 有剧毒, 民间常用作杀虫剂, 故亦名"菜虫药"。骆悦等[ 4] 发现, 断肠草甲醇粗提物及断肠草生物碱对福寿螺幼螺和成螺有良好的控制作用。然而断肠草对害鼠的研究鲜见报道, 本文选择断肠草提取物, 研究对小鼠的毒力作用, 为进一步研制植物性杀鼠剂提供技术参考。
1 材料与方法1. 1 小鼠 实验于2010 年3~ 4 月在广东省惠州南天生物科技有限公司进行。实验小鼠取自该公司养殖的昆明种小鼠, 繁殖多代, 选取体重18 ~ 22 g的健康小鼠做为实验对象。1. 2 断肠草 乙醇提取物(膏状) 由惠州南天生物科技有限公司经索氏抽提提取并提供。1. 3 试剂 75% 乙醇, 蒸馏水等, 市售。1. 4 仪器 电子天平、注射器、棕色小瓶、量筒、烧杯、玻璃棒。1. 5 方法 采用灌胃法[ 5] , 操作步骤如下: 以左手捉持小鼠, 使腹部朝上, 颈部拉直。右手持灌胃管(由1~ 2 m l注射器上连接磨去针尖的针头制成)。灌胃管长约4~ 5 cm, 直径约1 mm, 先从小鼠口角插入口腔内, 然后用灌胃管压其头部, 使口腔与食道成一直线。再将灌胃管从舌面紧沿上腭进入食道,灌胃管插入约1 /2处将药液注入。若遇阻力, 应退出灌胃管再插入, 注意操作时动作要轻。1. 6 断肠草提取物毒性试验1. 6. 1 断肠草提取物药液的配制 用电子天秤称取断肠草提取物1 g, 用10m l的20% 乙醇溶解, 搅拌均匀, 配制成浓度为0.1 g /m l的断肠草提取物母液, 盛于棕色小瓶中, 放入4% 冰箱保存。使用时以10倍梯度浓度稀释母液, 分别配制成0.1、0.01和0.001 g /m l 3个浓度药液。1. 6. 2 断肠草提取物毒性预测定 将小鼠按A( 0.1 g /m l)、B ( 0.01 g /m l)、C ( 0.001 g /m l)分为3组, 每组4只小鼠, 禁食12 h后用灌胃法对小鼠一次性注射0.5m ,l 然后正常喂养, 观察小鼠的反应,记录小鼠死亡时间及死亡数量。每个组重复3次。1. 6. 3 断肠草提取物毒性测定 随机选取48只小鼠, 按A ( 0.005 g /m l)、B ( 0.004 g /m l)、C ( 0.003g /m l)、D ( 0.002 g /m l)分为4组, 每组4只试鼠, 重复3次, 试验方法同1. 4. 2。1. 6. 4 小鼠中毒反应观察 灌胃后5 d内观察记录各组小鼠在注射后的反应及中毒症状。
2 结果与分析2. 1 毒杀预试验测定 灌胃0.5 m l断肠草提取物对小鼠的毒杀预测定结果见表1。0.1 g /m l断肠草提取物处理后, 小鼠在12 m in内全部死亡, 平均致死时间为7.4 m in; 注射灌胃断肠草提取物0.01g /m,l 小鼠在21 m in 内全部死亡, 平均致死时间为13.3 m in; 而灌胃断肠草提取物0.001 g /m l时, 在2d内未见小鼠死亡。同时还可看出, 当提取物浓度在0.01 g /ml以 上时, 随着浓度的增加小鼠死亡时间缩短。由此表明, 断肠草提取物在浓度达0.01 g /m l以上时对小鼠有较强的毒杀作用。故毒性试验中采用0.01~ 0.001 g /m l浓度进行测定。
2. 2 毒性试验结果 灌胃0.5 m l断肠草提取物对小鼠的毒性试验结果(表2)。当灌胃浓度为0.005g /m l时, 试鼠在20 m in内就全部死亡, 平均致死时间为12.8 m in; 当灌胃浓度为0.004 g /m l时, 试鼠在28 m in内死亡了5只, 剩余的2 d内未见死亡; 当灌胃浓度为0.003, 试鼠在16 m in时死亡1只, 剩余的2 d内未见死亡; 灌胃浓度为0.002 g /m l时, 2 d内均未见小鼠死亡。从表2中可看出, 小鼠的死亡率随着浓度的降低而降低, 死亡时间也向后推迟。灌胃浓度在0.005g /ml以上, 小鼠在20 m in内全部死亡。灌胃浓度为0.003 g /m l以上时, 28 m in内小鼠死亡率为41.67%。灌胃浓度达0.003 g /m l时, 小鼠的死亡率很低, 仅为8.33%, 表明对小鼠有明显毒杀作用的浓度为0.003~ 0.005 g /m,l且在这可致死浓度范围内, 随着作用剂量的增加, 小鼠的致死时间缩短。
2. 3 小鼠中毒症状观察 灌胃后, 最初小鼠无异常; 5 m in左右, 小鼠活动迟缓, 步伐不稳, 蜷缩着,头部开始抽动, 慢慢地小鼠全身颤抖; 再过一段时间后, 小鼠开始活跃跳动, 在鼠笼内四处窜跳, 颤抖更加厉害; 濒临死亡时, 小鼠继续挣扎, 前腿不动蹬后腿, 1 m in左右抽搐不止直至死亡。同时, 小鼠在挣扎过程中, 身体肤色由原来的粉红色逐渐变黑, 眼睛外突。此外, 观察还发现, 有些小鼠在后期会出现磨牙现象。
3 结论研究结果表明, 断肠草提取物对小鼠毒杀作用显著, 具有急性致死的效果。在可致死浓度范围内, 随着灌胃浓度的增加, 小鼠的致死时间减少, 一般致死时间约30 m in。当断肠草提取物浓度在0.005 g /m l以上时, 20m in内小鼠全部死亡。同时灌胃后小鼠具有一个短暂的潜伏期, 约5m in左右。之后, 小鼠则开始表现出一些全身颤抖、抽搐等症状, 直至死亡。据研究报道, 断肠草植株中含有的活性成分叫钩吻碱, 属于吲哚类碱, 植株各部分生物碱的含量以根皮部( 1.5% ~ 2.2% )为最高, 茎皮( 1% ~ 1.1% )次之, 茎含量为0.4% ~ 0.5%, 叶含量仅0.3% [ 3 ] 。这为下一步分离和提纯杀鼠活性成分, 为断肠草作为植物源灭鼠剂的开发提供了依据。
在实际防控工作中, 由于化学药物不断出现抗性、公害等问题, 人们越来越倾向于从天然物质中寻找更安全、更有效的活性物质, 以开发新型的植物源农药。植物性农药来源于自然, 有其顺畅的降解途径, 无残毒遗留, 不污染环境, 不易产生抗药性, 因此受到广泛关注。韩崇选等[ 6] 对多种植物进行了杀鼠活性的测定, 发现曼陀罗、苦参、铁棒锤等植物对试鼠具有较强的毒杀活性, 且无二次中毒现象发生。詹绍琛等[ 7] 用闹羊花进行灭鼠试验, 表明闹羊花叶煎剂灌服或毒饵试鼠都有较强的毒性。张美文等[ 8] 将烟草水煮液与玉米粉、面粉饵料按一定的比例制成的毒饵喂养小鼠, 表明烟草对鼠类也具有较好的毒杀作用。我国植物资源极为丰富, 对植物源农药的研究历史悠久, 有丰富的经验和深厚的基础。因此, 研究与开发安全性高的植物性灭鼠剂, 将成为现今新型灭鼠剂研制的热点, 对解决当前化学灭鼠剂所引起的社会和环境问题具有重要的意义。
